完整的细胞培养培养基通常由基本培养基(例如MEM)和添加剂(血清或细胞生长因子)组成,该培养基的配方会随着细胞所需的营养物质而不断改善,还使用了抗生素。还使用了光谱抗生素。另外,细胞的耐受性增加,导致耐药性。一些老师甚至选择不使用抗生素培养细胞以确保实验的准确性。
1.基本培养基
大多数培养基均基于平衡盐溶液(BSS),该盐溶液与氨基酸,维生素和其他营养物质混合,与血清中的浓度相似。最常见的生物培养基是Dulbecco的改良培养基DMEM,
它含有与MEM相同的营养素,但浓度却高出2-4倍。要选择用于细胞培养的特定培养基,您应该仔细了解成分表并选择适合细胞生长的培养基。通常,悬浮细胞更可能使用1640培养基,而贴壁细胞最常见的是DMEM。
在某些培养基中,谷氨酸由于其不稳定性而具有比其他氨基酸更高的浓度,并在许多细胞培养物中被广泛用作碳源.MEM和F12
所有人都应以5%的CO2平衡.DMEM含有较高浓度的NaCO3。在培养敏感神经细胞时,应使用10%的CO2进行补偿,当然也可以以较低的CO2浓度使用。该基础培养基的组成基于对不同细胞系生长的研究,但通常在原代培养中用于获得相对令人满意的结果。
基本上是HEPES
作为缓冲剂,它可用作碳酸氢盐的替代品,以减少对高浓度CO2培养环境的限制。在实际操作中,并不是那么简单。溶解的CO2和碳酸氢盐对于良好的细胞生长显然很重要。莱博维兹的L15
培养基以特征性的BSS为基础,其中含有高浓度的氨基酸以提高缓冲能力,半乳糖被用作培养基中的碳源,以防止培养基中乳酸的形成。丙酮酸的代谢产生溶解的二氧化碳。因此,用L-15培养基培养的细胞通常需要盖上培养瓶或使用100%空气培养。
二,血清
细胞无法在简单的基础培养基中存活。必须在特殊类型的细胞培养物中提供某些营养物质和生长因子,以使细胞能够生长并维持其生长状态。通常将血清添加到基础培养基中,血清的最终浓度通常为5%至20%。特定用途的血清来源必须根据经验确定。最广泛使用的血清是马血清
含胎牛血清
胎牛血清富含有丝分裂因子,通常被选作增殖细胞的血清,也用于细胞系和原代培养。马血清被广泛用于有丝分裂后的神经元培养。
不同批次的血清包含不同的成分,使用前应测试血清。大多数试剂供应商都提供样品,您可以选择满意的批号,以便一次可以收到足够的血清。
三,抗生素
细胞培养中最常用的抗生素是青霉素(通常浓度为25-100μg/ ml)和链霉素(25-100μg/ ml)。这两种抗生素
经常混杂。在某些实验室中,它们通常会添加到所有介质中。庆大霉素(10?100μg/ ml)通常具有广谱抗菌活性且溶液稳定,广泛用于一般实验室。
四,保持培养培养物应保存在培养箱中,培养箱可自动将O2和CO2混合以快速满足培养基设计要求,空气中的氧气浓度远高于血液和脑脊液中的氧气浓度。可以防止培养基在培养皿中蒸发并固定在培养箱中。湿度通常是水箱底部的一大池水,应经常更换水,并应经常对水箱进行消毒以防止发霉增长。如果培养箱已被霉菌孢子严重污染,则很难完全清除污染物。需要在培养箱中将培养物放置更长的时间,使用培养液较少的烧瓶和培养皿,并紧紧盖上盖子以防止蒸发,或使用适当的方法带比例气流的培养箱。
应定期检查温度的确切设置。培养箱的温度通常设置为37°C或更低。电池在低温下的耐受极限可能更长,但是如果温度升至39°C,它们将在数小时内死亡。